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血液中の妨害物質を除去するための前処理方法

投稿者 管理者 | 01 Mar

一般に、血液の複雑な組成により、多くの物質、特に高等動物の血漿または血清は、TAL (LAL) 試薬とエンドトキシンの間の反応に強い干渉作用を及ぼします。したがって、このようなサンプルのエンドトキシンを検査する場合は、検査前に妨害物質を除去する必要があります。

現在、血漿中の妨害物質としては、主に各種プロテアーゼ阻害剤、エンドトキシン結合タンパク質、プラスミノーゲン阻害剤が挙げられます。比色分析の場合、第 Xa 因子は Boc-LEU-Gly-Arg-PNA ペプチド鎖を分解できます。したがって、これらの妨害物質を除去してから判定する必要がある。

血液中の妨害物質を除去するための前処理方法は次のとおりです。

(1) 希釈加熱法:血漿を溶解水で3~10倍に希釈し、37~100℃の水中で加熱します。保持時間は通常 5 ~ 10 分です。

(2) クロロホルム抽出法: 同量のクロロホルムを血漿に加え、3 時間振動させた後、上層を検出用に採取します。

(3) エーテル処理法:血漿にエーテルを加えて処理し、40℃でエーテルを除去する。

(4) トリフルオロ酢酸法:血漿に酢酸を加えてpH 4.0に調整し、K2HPO4を使用してpHを7〜7.5に調整します。

(5) 界面活性剤処理法:希釈加熱法と同様に、希釈水のみを界面活性剤に変える。

(6) ゲル濾過;

(7) アルカリ処理法:血漿を0.2NNaOH、37℃で10分間保持し、その後HClで中和した。

(8) 過塩素酸法(PCA)または新過塩素酸法(新PCA)。

(9) ビーズ法:エンドトキシンを吸収する特殊な樹脂を血漿中に入れ、取り出し、LAL試薬を加えて反応させます。

このうち、一般的に用いられる方法としては、クロロホルム抽出法、希釈加熱法、過塩素酸(PCA)法、新過塩素酸(新PCA)法が挙げられます。最初の 2 つの方法は、エンドトキシンの回収率、偽陽性、その他の問題が存在するため、決定の際に議論する必要があります。 PCA法(新PCA法)は添加したエンドトキシンの回収率が良いため、現在日本では主に前臨床治療に使用されています。

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