実験の前に、すべての試薬とサンプルを室温に戻す必要があります。再溶解後、サンプルを再度遠心分離し、検査のために上清を採取する必要があります。試薬またはサンプル前処理の場合は、混合して泡立ちを避けてください。二重テストにはキャリブレーションとサンプルを使用することをお勧めします。

1. 追加: 標準使用溶液を最初の 2 つのウェルに順番に追加し、使用溶液の各濃度 100 に対して 2 つの穴を追加します。 μ 各ウェルの L。テストするサンプルを他のウェルに追加します。100 μ ウェルあたり L (サンプル濃度がテスト範囲を超える場合、サンプルは標準希釈液とサンプル希釈液で希釈されます)。マイクロプレートはフィルムコーティングされ、37℃でインキュベートされました。 ℃ 90分間ヒント: マイクロプレートの底にサンプルを追加するときは、気泡の発生を避けるために、穴の壁に触れないようにして、穏やかに振って混合してください。追加時間は 10 分以内に制御する必要があります。

2. ビオチン化抗体/抗原: 液体を捨て、洗浄せずに振盪乾燥させます。100 μL のビオチン化抗体/抗原作業溶液を各ウェルに直ちに添加し、混合し、マイクロプレートにフィルムをコーティングし、37℃で 1 時間インキュベートしました。

3. 洗浄: 穴内の液体を振り、各ウェルに 350 μ L の洗浄液を加え、1 ～ 2 分間浸し、マイクロプレート内の液体を吸い取るか振り落とし、厚い吸収紙の上で軽くたたいて乾燥させます。このプレート洗浄ステップを 3 回繰り返します。ヒント: 洗濯機はここでも他の洗濯ステップでも使用できます。洗浄の各ステップは実験にとって不可欠です。

4. HRP酵素複合体: 100 μ ウェルあたり L の酵素複合体作業溶液を混合し、フィルムでコーティングし、37 ℃でインキュベート ℃ 30分間。

5. 洗浄：ウェル内の液を捨て、ステップ3と同様にプレートを5回洗浄します。

6. 基質：各ウェルに90μLの基質溶液（TMB）を加え、よく混合し、フィルムコーティングを加え、37℃で約15分間インキュベートします。注: インキュベーション時間は、実際の発色状況に応じて短縮または延長する必要がありますが、30 分を超えないようにしてください。標準穴に明確なグラデーションが現れたら終了できます。

7. 終了: 50 を追加 μ 反応を停止させるために、各ウェルに停止溶液 1L を加えます。注: 停止溶液の添加順序は基質溶液の添加順序と同じである必要があります。

8. 読み取り: マイクロプレート リーダーを使用して、各ウェルの光学密度 (OD) を 450 nm で直ちに測定します。テスト手順を設定するには、事前にマイクロプレートリーダーを開いてください。

9. 実験後、未使用の試薬は、賞味期限まで指定の保管温度に従って冷蔵庫に戻してください。