卓上低速凍結遠心分離機による細胞質および核タンパク質の抽出のための遠心分離の詳細な手順

投稿者管理者 | 23 Mar

卓上低速凍結遠心機は、実験室で生体高分子や沈殿物などの一次分離・抽出に使用されます。スイベルヘッドは主にアルミニウム合金製で、フラットタイプとアングルタイプがあります。遠心管は硬質ガラス管、ポリエチレン硬質プラスチック管、ステンレス管でできています。遠心分離機には、駆動モーター、タイマー、レギュレーター（速度インジケーター）、冷却システム（調整可能な温度範囲は-20〜40℃）が装備されており、目的に応じて異なる容量と異なる種類の回転速度の回転ヘッドを交換できます。遠心力材料のニーズに応えます。

デスクトップ低速凍結遠心分離機による細胞質および核タンパク質の抽出のための遠心分離の詳細な手順:

1. 細胞の増殖状態を確認します。細胞の増殖状態は 80% 以上である必要があります。

2. 1500r/minで5分間遠心分離します。

3. 上清を捨て、等量の冷PBSで細胞を洗浄し、ステップ2と同様に3回繰り返します。

4. 推定沈殿量に応じて、5 倍量の等張シスバッファーを細胞粒子に添加し、細胞を穏やかに懸濁させ、泡立ちをできるだけ避けます。

5. 懸濁した細胞に溶解バッファーを加え、氷上に 15 分間置き、細胞を増殖させます。顕微鏡で確認できます。

6. 細胞実験で増殖した細胞には、最終濃度が 0.3% になるように 10% IGEPALCA-630 を加え、よく混合し、静かに加えます。

7. 直ちに遠心分離します（大量の場合は 1.5 ml EP チューブを 5500 r/min で 30 秒間使用します。大量の場合は 50 ml チューブを 5500 r/min で 2 分間使用します）。

8. 上清（細胞質タンパク質）を新しい凍結チューブに移します。

9. 5 倍量の懸濁粒子を含む細胞を等張バッファーに懸濁し、よく混合します。

10. 細胞懸濁液を 1500r/min で 5 分間遠心分離し、上清を除去します。

11. 抽出バッファーの 2/3 倍の量で粒子を懸濁します。

12. チューブを振動ミキサーに置き、700r/min で 15 分間、次に 1400r/min で 15 分間振盪して混合します。プロセス全体で泡が発生しないように注意する必要があります

13. 9400r/minで15分間遠心分離し、低温遠心分離後、上清を新しい凍結遠心管に移します。

14.数回に分けて液体窒素で凍結させて保存します（長期保存の場合は-80℃、短期保存の場合は-20℃）

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