ELISA検出実験の補助材料として酵素を使用します。 皿 決定的な役割を果たし、最終的な実験結果に直接影響します。の品質 酵素プレート 主に、タンパク質吸着に対する感度、プレートと穴の間のタンパク質吸着能力の違い、および購入した製品のバッチ間の違いに依存します。 酵素プレート 。したがって、 酵素プレート タンパク質吸着感度が高い製品、タンパク質吸着能力の穴間の差が小さい、バッチ間の差が小さいということは、実験者が信頼性の高い安定した実験結果を得ることが保証されています。

酵素プレート 分類: さまざまな分類基準に従って、 プレートには さまざまな分類。

1: 穴の数に応じて、96穴、48穴などに分けることができます。 酵素プレート 主にマイクロプレートリーダーで使用されます。 皿 市販のメーターは最大でも96穴なので、マイクロプレートも96穴です。

2: さまざまな底に応じて、平底、U底、V底などに分けられます。

平坦なベースの屈折率は低いため、マイクロプレートでの検出に適しています。

T he Uマイクロプレートの屈折率は高く、サンプリング、サンプリング、混合に便利で、マイクロプレートに置かずに色の変化を直接観察して、対応する免疫反応があるかどうかを判断できます。

Vベースのマイクロプレートはサンプルを正確に吸着します。

3: マイクロプレートとタンパク質やその他の分子の結合能力の違いに応じて、高結合力、中結合力、アミノ化に分けられます。

(1) 高い結合力

このマイクロプレートの表面後、そのタンパク質結合能力は大幅に強化され、最大 300 ～ 400ng IgG / cm2 となり、主に結合するタンパク質の分子量は > 10 kD になります。このクラスのマイクロプレートを使用すると感度が向上し、コーティングするタンパク質の濃度や量を相対的に減らすことができるため、非特異反応が生じやすくなります。抗原または抗体でコーティングした後、非イオン性界面活性剤は結合していないタンパク質の部位を効果的にシールできないため、タンパク質をシーラント剤として使用する必要があります。

(2) 中程度の結合力

このようなマイクロプレートプレートは、表面の疎水性結合を介してタンパク質に受動的に結合し、200 ～ 300 ng IgG / cm2 のタンパク質結合容量を備え、分子量 > 20 kD の高分子タンパク質の固相担体として適しています。高分子にのみ結合するという特性により、非特異的な交差反応の可能性を低減するための未精製の抗体または抗原としての固相担体に適しています。プレートには、不活性タンパク質またはシーリング溶液としての非イオン性界面活性剤を使用できます。

(3) アミノ化

表面修飾後のこのマイクロプレートは、正に帯電したアミノ基を持ち、その疎水結合が親水結合に置き換わります。このクラスのマイクロプレートは、小分子タンパク質の固相担体として適しています。適切な緩衝液と pH を使用すると、表面はイオン結合を介してマイナスに帯電した小分子に結合します。表面の親水性と他の架橋剤による共有結合能力により、Triton-100、Tween 20 などの除染剤に可溶なタンパク質分子の固定に使用できます。このプレートの欠点は次のとおりです。疎水性が低下するため。さらに、表面が効果的に閉じられている必要があります。親水性および共有結合性の表面特性のため、使用されるシーリング溶液は、非反応性アミノ基の任意の官能基および選択された架橋剤と相互作用できなければなりません。

4. 色によって透明、黒、白に分けられます。

透明は、最も一般的な酵素免疫免疫実験に最もよく使用されます。透明なマイクロプレートとは対照的に、発光検出用の不透明なマイクロプレートもあり、通常は白と黒です。黒色のマイクロプレートはそれ自体に光吸収があるため、白色のマイクロプレートに比べて信号が非常に低いため、一般的には蛍光検出などの強い光を検出する場合に使用されます。白いマイクロプレートは微弱な光の検出に使用され、一般的な化学発光によく使用されます。さらに、黒色のマイクロプレートは非特異反応の問題を弱めることもできます。同時に、化学発光反応によって発せられる光は等方性であるため、一般的なマイクロプレートでは発光検出ができないことに注意することが重要です。透明なマイクロプレートの場合、光は垂直方向から広がるだけでなく、水平方向からも光が穴と穴壁の隙間を通りやすくなり、その結果、穴の光の吸収値が隣接する穴の発光の影響を受けることになります。

優れたマイクロプレートは、優れた吸着性能、低いブランク値、穴底の透明度が高く、プレート間および同じプレートの穴間で同様の性能を備えている必要があります。原材料の違いや製造工程の違いにより、さまざまな製品の品質が大きく異なるため、マイクロプレートの各バッチの性能を事前に確認してから使用する必要があります。一般的な検査方法は、ELISAプレートのウェルに一定濃度のヒトIgG（通常10ng/ml）をコートし、洗浄後、各ウェルに酵素標識抗ヒトIgG抗体を適切に希釈して添加し、保温後洗浄し、基質色を添加し、酵素反応を停止し、各ウェル内の溶液の吸光度をそれぞれ測定します。反応条件は、各ウェルの読み取り値が約 0.8 の吸光度に保たれるように制御されました。合計読み取り値の平均を計算しました。すべての個々の測定値の平均とすべての測定値の差は 10% 未満でなければなりません。以下の 3 つのマイクロプレートは、例として A、B、C です。

直接法：マイクロプレート表面へのヒトIgGの吸着を検出する

二重抗体サンドイッチ法：血清中の抗原が抗ヒト抗体陽性

上図からわかるように、これら 3 種類のバイオ酵素プレートでは、クラス A マイクロプレートの方がタンパク質の吸着効果が優れていますが、タンパク質の吸着感度も向上し、より信頼性の高い実験データが得られます。また、ロット違いのプレートもご相談いただけます。以下は、あるプレートのロット違いです。バッチ内差分データ チャートからわかるように、マイクロプレートはバッチ間での安定性が良好で、バッチ内変動係数 (CV) の差は約 5.0% であり、バッチ内変動係数よりも大幅に低いことがわかります。臨床免疫反応の品質管理基準の10.0%未満。したがって、ELISA実験にも適しています。