1. 血液中のエンドトキシンを測定する場合は、方法と試薬の選択に注意してください。

2. 血漿または血清の調製

一般的な臨床サンプルとしては血漿が主なサンプルであり、その利用率は 95% 以上です。したがって、体液の主要部分である血漿を調製することが非常に重要です。 Das氏によれば、血小板には一般にエンドトキシンが遊離状態に加えて付着しているため、血小板を多く含む血漿をサンプルとして使用することがより適切であるとのこと。現在、海外ではヒト血漿や動物血漿を調製する場合、細胞障害を防ぐため、血小板を多く含む血漿サンプルを用いて、4℃ 1000g×10分間の分離条件や3000g×40回の分離条件での低温分離が主流となっています。低温遠心分離機を使用しない場合の分離条件は秒です。常温では高速かつ長時間の分離はできません。さらに、血漿または血清を分離する際には、細菌汚染を避ける必要があります。

血清の調製：抗凝固剤を含まないシリンジを使用して血液を採取し、遠心分離管に移し、氷水浴中に30分間、4℃、1000×gで10分間遠心分離する。

血漿または血清を分離した後、一時的に使用しない場合は、-80℃で凍結して1ヶ月以内に使用できます。注意事項 エンドトキシンの吸着を避けるため、保存にはガラス製試験管をご使用ください。

3. 抗凝固剤の種類とその効果

血漿の調製中に特定の抗凝固剤が添加されるため、抗凝固剤の種類と量は回収率に大きな影響を与えます。一般に、よく使用される抗凝固剤には、主にヘパリン、クエン酸ナトリウム、EDTA が含まれ、その中でヘパリンが最も広く使用されています。ただし、ヘパリンの添加量が多いと、特に希釈加熱法やクロロホルム抽出法ではエンドトキシン反応が阻害され、回収率は低下しますが、PCA法への影響は少ないことがわかっていますので、ヘパリンの添加量を調整する必要があります。血漿調製中に放出されるのは 2~5 μ L/ml だけで十分です。